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【20230309期】特定蛋白方法學---散射＆透射？
2023-03-16
什麽是特定蛋白？
特定蛋白：在人體血清中含有許多蛋白質,它們來源於組織細胞,是血清中含有的功能蛋白,執行著各種功能,很多疾病都可以引起血清蛋白質的變化，蛋白質具有良好的抗原性，利用蛋白質的抗原性，可以采用抗原-抗體反應對具有某一特定抗原性的蛋白質進行測定，故又稱特定蛋白檢測，可存在於血液、腦脊液、尿液等體液中。
02
特定蛋白檢測基本原理
1、光學的理論發展：免疫比濁法是基於比色法的基礎發展，由雙價的抗體和單價的抗原間反應產生了免疫沉澱。
2、透射、散射區別：
透射比濁：檢測由抗原抗體結合成抗原抗體複合物，產生的濁度隨抗原量增加而增加，其透光率強度隨之減弱，根據吸光度值計算待測抗原的量。
散射比濁：檢測由抗原抗體結合產生成抗原抗體複合物顆粒，導致的光散射，散射光強度與單位時間內抗原抗體複合物的生成速率成正比。
03
特定蛋白檢測標準化工作
❂ 1967:WHO 67/86成為首批免疫球蛋白校準品
❂ 1980:CAP研製血清蛋白參考物質（RPSP-1),隨後又研製出RPSP-2/3/4
❂ 1993:IFCC研製CRM 470,一種通用的參考物質，包含了14種血清特定蛋白，後更名為ERM-DA470
❂ 2008:IFCC研製出最新的ERM-DA470K/IFCC
❂ 2010:IFCC為CRP製備液體冰凍參考物質ERM-DA472/IFCC,與ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
❂ 2010:IFCC研製胱抑素C參考物質ERM-DA471/IFCC
❂ 2011:IFCC為CRP研製出新的參考物質ERM-DA474/IFCC
04
特定蛋白抗原過剩情況
1、使反應信號低於分析測量範圍上限對應的檢測信號，結果出現假性低值
如下圖，不同抗原濃度的兩點具有相同的測量信號：
05
特定蛋白檢測中鉤狀效應的影響
鉤狀效應即HOOK效應，是指由抗原抗體比例不合適而導致的假陰性的現象。
抗體過量叫做前帶效應；
抗原過剩叫做後代效應。
在恒定抗體濃度下增加抗原濃度的免疫沉澱反應
免疫比濁法麵對抗原過剩的問題，該如何解決？
3、如何處理抗原過剩
儀器反應線性參數的設置：通過對事件反應進程曲線的檢測，計算反應不同時段的速率比值與預設的參數進行比較自動識別鉤狀效應的出現
反應近終點時再添加抗原
*文章圖片來源網絡，如侵權請聯係刪除。
特定蛋白：在人體血清中含有許多蛋白質,它們來源於組織細胞,是血清中含有的功能蛋白,執行著各種功能,很多疾病都可以引起血清蛋白質的變化，蛋白質具有良好的抗原性，利用蛋白質的抗原性，可以采用抗原-抗體反應對具有某一特定抗原性的蛋白質進行測定，故又稱特定蛋白檢測，可存在於血液、腦脊液、尿液等體液中。
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特定蛋白檢測基本原理
1、光學的理論發展：免疫比濁法是基於比色法的基礎發展，由雙價的抗體和單價的抗原間反應產生了免疫沉澱。
2、透射、散射區別：
透射比濁：檢測由抗原抗體結合成抗原抗體複合物，產生的濁度隨抗原量增加而增加，其透光率強度隨之減弱，根據吸光度值計算待測抗原的量。
散射比濁：檢測由抗原抗體結合產生成抗原抗體複合物顆粒，導致的光散射，散射光強度與單位時間內抗原抗體複合物的生成速率成正比。
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特定蛋白檢測標準化工作
❂ 1967:WHO 67/86成為首批免疫球蛋白校準品
❂ 1980:CAP研製血清蛋白參考物質（RPSP-1),隨後又研製出RPSP-2/3/4
❂ 1993:IFCC研製CRM 470,一種通用的參考物質，包含了14種血清特定蛋白，後更名為ERM-DA470
❂ 2008:IFCC研製出最新的ERM-DA470K/IFCC
❂ 2010:IFCC為CRP製備液體冰凍參考物質ERM-DA472/IFCC,與ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
❂ 2010:IFCC研製胱抑素C參考物質ERM-DA471/IFCC
❂ 2011:IFCC為CRP研製出新的參考物質ERM-DA474/IFCC
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特定蛋白抗原過剩情況
1、使反應信號低於分析測量範圍上限對應的檢測信號，結果出現假性低值
如下圖，不同抗原濃度的兩點具有相同的測量信號：
05
特定蛋白檢測中鉤狀效應的影響
鉤狀效應即HOOK效應，是指由抗原抗體比例不合適而導致的假陰性的現象。
抗體過量叫做前帶效應；
抗原過剩叫做後代效應。
在恒定抗體濃度下增加抗原濃度的免疫沉澱反應
免疫比濁法麵對抗原過剩的問題，該如何解決？
3、如何處理抗原過剩
儀器反應線性參數的設置：通過對事件反應進程曲線的檢測，計算反應不同時段的速率比值與預設的參數進行比較自動識別鉤狀效應的出現
反應近終點時再添加抗原
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